MCF-7 是一種很好養的人乳腺癌細胞，培養基用DMEM或RPMI1640均可， 10－15％的小牛血清就能長得很好。一般兩到三天傳一代。傳代也很常規。吸出培養基，加入0.25％的胰酶1ml，輕輕晃動培養瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除殘余的培養基。再加入2ml胰酶（25ml培養瓶）靜置消化2－5min，待細胞縮起變圓，將胰酶吸出加入培養基3ml吹打成單細胞懸液分瓶即可。我一般都不用緩沖液沖洗，而直接用胰酶沖洗一下以去除剩余血清的作用，感覺效果還不錯。因為MCF-7消化較快，一般不放到培養箱中消化，以免消化太過。需要注意的是MCF-7生長較快如不及時傳代可出現整瓶細胞浮起，一般都來不及搶救。
MDA-MB-231 人乳腺癌細胞
細胞中文名稱人乳腺癌細胞
細胞英文名稱 MDA-MB-231
物種人
細胞形態特征上皮樣
細胞生長特性貼壁生長
細胞特種特性 MDA-MB-231是從一名51歲的白人女性乳腺癌患者的胸水中分離建立的。該細胞表達表皮生長因子EGF受體、TGF-α受體和WNT7B癌基因
培養基 L15: Leibovitz Medium
血清 10%FBS
細胞傳代方法 1:2~1:4傳代；每周2~3次
細胞傳代情況 C5
細胞凍存條件MDA-MB-231 人乳腺癌細胞基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
說明
培養基：DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10%
培養條件：37℃ 5% CO2
消化條件：0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA溶液，消化5-10min
傳代的比例：1：2~1：4
換液時間：2~3天換液一次
凍存液比例：85%培養基，10%FBS, 5% (v/v) DMSO
凍存密度：1-2 ×10 6/管，液氮保存
MDA-MB-231 人乳腺癌細胞復蘇方法：取出凍存管后，投入37 ℃水浴中，震蕩解凍2 min，酒精消毒管壁外側后，將其轉入超凈臺中，將管內細胞轉移**離心管中，加入5 ml 37 ℃預熱的培養基，并清洗凍存管一次，將離心管離心（1000 rpm，5 min），棄去上清液，再加入2 ml培養基，轉入培養瓶中培養。
 
產品名稱：人正常乳腺細胞 Hs 578Bst
規格：70%密度的25cm2培養瓶的細胞一瓶
特點：細胞代數為4-5代左右
包裝：內層無菌自封袋；專用防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說明書
細胞來源：ATCC、sciencell、ICLC
貨期：1-2周
運輸方式：快遞運輸
售后：收到細胞后7天，如發現細胞有質量問題（如污染，死亡，快遞運輸等原因）時，應出具書面質量問題報告并及時傳真或E-mail致銷售人員，我們將盡快為您解決。
細胞培養常見問題分析
細胞培養
1、冷凍管應如何解凍？
取出冷凍管后，須立即放入37 ℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。
2、細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DMSO？
除少數特別注明對DMSO 敏感之細胞外，jue大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養條件不同之培養基？
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基，若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基，細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活。
4、可否使用與原先培養條件不同之血清種類？
不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
5、何謂FBS, FCS, CS, HS ?
FBS （fetal bovine serum）和FCS （fetal calf serum）是相同的意思，兩者都是指胎牛血清， FCS 乃錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS （calf serum）則是指小牛血清。HS （horseserum）則是指馬血清。
6、培養細胞時應使用5 % 或10% CO2？或根本沒有影響？
一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統，而培養基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養時應使用的CO2 濃度。當培養基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時，細胞培養時應使用10 % CO2；當培養基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時，則應使用5 % CO2 培養細胞。
7、何時須更換培養基？
視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數據上之更換時間，按時更換培養基即可。
8、培養基中是否須添加抗生素？
除于特殊篩選系統中外，一般正常培養狀態下，培養基中不應添加任何抗生素。
9、附著性細胞繼代時所使用之trypsin-EDTA 濃度？應如何處理？
一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于–20 ℃，避免反復冷凍解凍造成trypsin 之活性降低，并可減少污染之機會。
10、懸浮性細胞應如何繼代處理？
一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養液太多時，可將培養角瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養液**另一新的培養角瓶，加入新鮮培養基稀釋**適當濃度，重復前述步驟即可。#p#分頁標題#e#
11、欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速？
欲回收動物細胞，其離心速率一般為300xg （約1,000rpm），5 - 10 分鐘，過高之轉速，將造成細胞死亡。
12、細胞之接種密度為何？
依照細胞株基本數據上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。
13、細胞冷凍培養基之成份為何？
動物細胞冷凍保存時**常使用的冷凍培養基是含5 - 10 %DMSO （dimethyl sulfoxide）和90 - 95 % 原來細胞生長用之新鮮培養基均勻混合之。注意：由于DMSO 稀釋時會放出大量熱能，故不可將DMSO 直接加入細胞液中，必須使用前先行配制完成。
14、DMSO 之等級和無菌過濾之方式為何？
冷凍保存使用之DMSO 等級，必須為Tissue culture grade之DMSO （如Sigma D2650），其本身即為無菌狀況，次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于4°C，避免反復冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質，并可減少污染之機會。若要過濾DMSO，則須使用耐DMSO 之Nylon 材質濾膜。
15、冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→（-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃**–80 ℃以下，再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
15、細胞欲冷凍保存時，細胞冷凍管內應有多少細胞濃度？
冷凍管內細胞數目一般為1x106 cells/ml vial，融合瘤細胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。
16、應如何避免細胞污染？
細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉漿菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環境、與品質良好之細胞來源和培養基配制是減低污染之方法。
17、如果細胞發生微生物污染時，應如何處理？
加入相應抗生素。直接滅菌后丟棄之。
18、支原體（mycoplasma）污染的細胞，是否能以肉眼觀察出異狀？
不能。除極有經驗之**外，大多數遭受支原體污染的細胞株，無法以其外觀分辨之。
19、支原體污染會對細胞培養有何影響？
支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數，代謝及研究之任一數據。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結果之數據方有意義。
20、CO2 培養箱之水盤如何保持清潔？
定期（**少每兩周一次）以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。
21、為何培養基保存于4 ℃冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值會越來越偏堿性？
培養基保存于4 ℃冰箱中，培養基內之CO2 會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性。而培養基中之酸堿指示劑（通常為phenol red）的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿之結果，將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基偏堿時，可以通入無菌過濾之CO2，以調整pH 值。
22、各種細胞培養用的dish，flask是否均相同？
不同廠牌的dish 或flask，其所coating 的polymer 不同，制造程序亦不同，雖對大部分細胞沒有太大之影響，惟少數細胞則可能因使用廠牌不同之dish 或flask 而有顯著之生長差異。
23、購買之細胞冷凍管經解凍后，為何會發生細胞數目太少之情形？購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？
研究人員在細胞培養時出現存活率不佳，常見原因可歸納為：培養基使用錯誤或培養基品質不佳。血清使用錯誤或血清的品質不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養溫度使用錯誤。細胞置于–80℃太久。
24、收到之冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因？
冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫，乃因熱脹冷縮之物理現象，冷凍管有可能因此而造成細胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時，均應立刻將冷凍管再一次扭緊。
25、如何選用特殊細胞系培養基？
培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，**MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個好的開始，各種目的無血清培養**AIM V（12005）培養基（SFM）。
26、L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？
L-谷氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解，但是確切的降解率一直沒有**終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。
27、GlutaMAX-I是什么？培養細胞如何利用GlutaMAX-I？這個二肽有多穩定？
GlutaMAX-I 二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I 二肽溶液有**小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。#p#分頁標題#e#
28、什么培養基中可以省去加酚紅？
酚紅在培養基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應，培養細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養基。
29、培養基中丙酮酸鈉的作用是什么？
丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
30、二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么？
二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用EDTA清洗細胞，以消除來自培養基中所有的二價離子。
31、書上說，Hank‘s 平衡鹽溶液（HBS）要在空氣中使用，不需要CO2培養箱。原因是什么？Hank’s 平衡鹽溶液（HBS）和Earle‘s平衡鹽溶液（EBS）有什么本質的功能差別？
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles （2.2g/L）中比在Hanks （0.35g/L）中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。